האם יש שיטות אחרות לטיהור מוצרי PCR?

2024 מְחַבֵּר: Miles Stephen | [email protected]. שונה לאחרונה: 2023-12-15 23:36

עבור אותם יישומים שדורשים PCR ניקוי או אימות של PCR תוצאות, שם הם שניים שיטות בדרך כלל אחריו: מוצר PCR בידוד באמצעות עמודה, וג'ל טָהֳרָה מג'ל אגרוז.

כאן, איזה סוג של כרומטוגרפיה משמש לטיהור מוצרי PCR?

כדי לטהר את מוצרי ה-PCR, נעשה שימוש בכרומטוגרפיה של אי הכללת גודל. זה לוכד מולקולות קטנות כמו חלבון, פריימרים , ונוקלאוטידים בעוד מולקולות גדולות כמו מוצרי PCR גדולות מכדי להיכנס לחרוזים ולעבור דרך העמודה לתוך צינורות האיסוף.

כמו כן, איך מטהרים DNA? בעיקרון, אתה יכול לְטַהֵר שֶׁלְךָ DNA דגימות על ידי ליטוש של דגימות התא ו/או הרקמה שלך תוך שימוש בהליך המתאים ביותר (שיבוש מכני, טיפול כימי או עיכול אנזימטי), בידוד חומצות הגרעין מהמזהמים שלה וזירזתה בתמיסת חיץ מתאימה.

בנוסף, מדוע אנו מטהרים מוצר PCR?

טָהֳרָה של DNA מא PCR התגובה נחוצה בדרך כלל לשימוש במורד הזרם, ומקלה על הסרת אנזימים, נוקלאוטידים, פריימרים ורכיבי חיץ. השיטות הנפוצות משתמשות בעמודות ספין המכילות מטריצת סיליקה שאליה ניתן לקשור DNA באופן סלקטיבי בנוכחות מלחים כאוטרופיים.

למה צריך לנקות את ה-DNA?

אָנוּ לְנַקוֹת לְמַעלָה DNA מתמיסות מימיות להסרת מלחי חיץ, אנזימים או חומרים אחרים שעלולים להשפיע על יישומים במורד הזרם. דוגמאות כוללות תגובת PCR לְנַקוֹת לְמַעלָה, לְנַקוֹת למעלה לאחר עיכול הגבלה ו לְנַקוֹת למעלה של גנומי או פלסמיד DNA מזוהם בחלבונים/פסולת תאיים.