כיצד מחושב ריכוז ה-DNA באמצעות ספקטרופוטומטר?

2024 מְחַבֵּר: Miles Stephen | [email protected]. שונה לאחרונה: 2023-12-15 23:36

ריכוז DNA הוא מוערך על ידי מדידת ספיגה ב-260nm, התאמת ה-A₂₆₀ מדידה עבור עכירות ( נמדד לפי ספיגה ב-320 ננומטר), הכפלה על ידי גורם הדילול, ו באמצעות מערכת היחסים ש-A₂₆₀ של 1.0 = 50 מיקרוגרם/מ ל dsDNA טהור.

אנשים גם שואלים, איך מוצאים את הריכוז והטוהר של ה-DNA?

להעריך טוהר ה-DNA , למדוד ספיגה מ-230 ננומטר עד 320 ננומטר כדי לזהות מזהמים אפשריים אחרים. הנפוץ ביותר חישוב טוהר הוא היחס בין הספיגה ב-260nm חלקי הקריאה ב-280nm. איכות טובה DNA יהיה א'₂₆₀/א₂₈₀ יחס של 1.7-2.0.

כמו כן, מהו ריכוז DNA טוב? א טוֹב איכות DNA לדוגמא צריכה להיות A₂₆₀/א₂₈₀ יחס של 1.7-2.0 ו-A₂₆₀/א₂₃₀ יחס של יותר מ-1.5, אך מכיוון שהרגישות של טכניקות שונות למזהמים אלו משתנה, יש לקחת ערכים אלה רק כמדריך לטוהר הדגימה שלך.

לגבי זה, איך NanoDrop מחשב את ריכוז ה-DNA?

אתה מכפיל את ערך הספיגה ב-260 ננומטר בגורם קבוע (זה 50 עבור DNA ) ואתה מקבל את ריכוז DNA . וואלה. (באופן טכנית זה ה-A260 של מדגם בעובי 10 מ"מ שמוכפל ב-50; NanoDrop מבטא את A260 כאילו הדוגמה הייתה בעובי 10 מ"מ, כמו בקובטה רגילה).

מדוע היינו צריכים להשתמש בספקטרופוטומטר כדי לכמת את ה-DNA שלנו?

א ספקטרופוטומטר הוא מסוגל לקבוע את הריכוזים הממוצעים של חומצות הגרעין DNA או RNA הקיים בתערובת, כמו גם טוהר שלהם. באמצעות חוק באר-למברט זה הוא ניתן לקשר בין כמות האור הנספגת לריכוז המולקולה הבולעת.