כמה עולה להפוך קשירה?

2024 מְחַבֵּר: Miles Stephen | [email protected]. שונה לאחרונה: 2023-12-15 23:36

טרנספורמציה . הוסף בין 1-5 μl של קשירה תערובת לתאים מוכשרים עבור טרנספורמציה . מורחב קשירה עם PEG גורם לירידה פנימה טרנספורמציה יעילות (מהיר קשירה קִיט). מומלץ להשתמש באלקטרופורציה עבור מבנים גדולים (>10,000 bp).

מכאן, כמה תוצר קשירה אני צריך עבור טרנספורמציה?

טרנספורמציה . הוסף בין 1-5 μl של קשירה תערובת לתאים מוכשרים עבור טרנספורמציה . מורחב קשירה עם PEG גורם לירידה פנימה טרנספורמציה יעילות (מהיר קשירה קִיט). מומלץ להשתמש באלקטרופורציה עבור מבנים גדולים (>10,000 bp).

לאחר מכן, השאלה היא, מה זה קשירה וטרנספורמציה? בניסוי שיבוט טיפוסי, החוקרים מחדירים תחילה פיסת DNA, כגון גן, לתוך פיסת DNA מעגלית הנקראת פלסמיד. שלב זה משתמש באנזימי הגבלה וב-DNA ligase והוא נקרא a קשירה . אחרי קשירה , השלב הבא הוא העברת ה-DNA לתוך חיידקים בתהליך שנקרא טרנספורמציה.

לאחר מכן, אפשר גם לשאול, כמה DNA צריך לקשירה?

הריכוז הכולל של וקטור + הוספה צריך להיות בין 1-10 Μg/ml ליעילות קשירה . מומלצים וקטור: יחס טוחנות בין 1:1 ל-1:10 (1:3 אופייני). אם אתם לא בטוחים בכם DNA ריכוזים, לבצע קשירות מרובות ביחסים משתנים.

כמה זמן אפשר לאחסן תגובת קשירה?

קשירות יכולות להיעשות בטמפרטורת החדר או קריר יותר (חשבו 12-16 מעלות צלזיוס) למשך הלילה או אפילו לכמה ימים, אם אתה ממש עסוקים. אתה יכול גַם לאחסן קשירה במקרר ומוציאים אותו מאוחר יותר כדי להמשיך לקשור בטמפרטורת החדר למשך כמו ארוך כנדרש.