מהי המטרה של טיהור מוצר PCR?

2024 מְחַבֵּר: Miles Stephen | [email protected]. שונה לאחרונה: 2023-12-15 23:36

טָהֳרָה של DNA מא PCR התגובה נחוצה בדרך כלל לשימוש במורד הזרם, ומקלה על הסרת אנזימים, נוקלאוטידים, פריימרים ורכיבי חיץ. באופן מסורתי זה הושג באמצעות שיטות מיצוי אורגניות, כגון מיצוי פנול כלורופורם, ולאחר מכן משקעים אתנול.

כמו כן השאלה היא, מדוע יש צורך לטהר מוצרי PCR?

אתה צריך לטהר מוצרי PCR להיפטר מפריימרים, נוקלאוטידים ואנזימים שאינם בשימוש על מנת לייעל את הצלחת הקשירה, שתשמור על רצף מוצר שֶׁל PCR . ל לְטַהֵר ה מוצרי PCR , נעשה שימוש בכרומטוגרפיה של אי הכללת גודל.

בנוסף, מה עלי לעשות לאחר PCR? כדי למקסם את ההתאוששות, שטפו את כוס ה-retentate פעמיים עם 10 עד 20 µL TE או מים. הגמר PCR התגובה עשויה להכיל עד מיקרוגרם של DNA מוגבר שיכול לשמש למגוון יישומי ביולוגיה מולקולרית. יישומים אלה עשויים להיות רגישים יותר או פחות לשאר המרכיבים של ה- PCR תערובת תגובה.

אפשר גם לשאול, איך מנקים מוצרי PCR?

שיטות קלאסיות נהגו לְנַקוֹת לְמַעלָה מוצרי PCR לפני הרצף כוללים אלקטרופורזה של ג'ל, משקעים אתנול וכרומטוגרפיה עמודה. אמנם יעילות למדי, אך שיטות אלה יכולות להפוך במהירות למסורבלות בעת עיבוד דגימות מרובות במקביל ומציגות דרגות שונות של אובדן דגימות.

למה צריך לנקות את ה-DNA?

אָנוּ לְנַקוֹת לְמַעלָה DNA מתמיסות מימיות להסרת מלחי חיץ, אנזימים או חומרים אחרים שעלולים להשפיע על יישומים במורד הזרם. דוגמאות כוללות תגובת PCR לְנַקוֹת לְמַעלָה, לְנַקוֹת למעלה לאחר עיכול הגבלה ו לְנַקוֹת למעלה של גנומי או פלסמיד DNA מזוהם בחלבונים/פסולת תאיים.